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你了解熒光染色原理知識嗎

閱讀：8885 發(fā)布時(shí)間：2021-8-6
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CytekTM Aurora光譜流式可配置高達(dá)5激光，3個(gè)散射光和64個(gè)熒光檢測通道，能夠滿足所有實(shí)驗(yàn)室的需求。Aurora可以使用大量的熒光染料組合而無需為每個(gè)應(yīng)用重新設(shè)置儀器。光學(xué)系統(tǒng)和低噪音的電子系統(tǒng)帶來了*的靈敏度和分辨率。擁有平頂光斑設(shè)計(jì)，結(jié)合*的液流系統(tǒng)，充分保證了高流速采集樣本的出色性能。
熒光染色原理：
免疫熒光染色：細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)的抗原分子與相應(yīng)的熒光素標(biāo)記McAb作用一定時(shí)間后形成帶有熒光素的抗原抗體復(fù)合物，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出特定的熒光，其熒光強(qiáng)度與被測定抗原分子含量呈比例關(guān)系，由此可求得被測細(xì)胞與標(biāo)記McAb相對應(yīng)抗原的表達(dá)量和陽性細(xì)胞百分比。
常用的熒光染料有異硫氰酸熒光素（FITC）、藻紅蛋白（PE）、別藻青蛋白（APC）和Perdinin葉綠素（PerCP）等，經(jīng)488nm激光激發(fā)后其發(fā)射熒光光譜有差別，因而可將其用于標(biāo)記不同的McAb進(jìn)行單色或多色免疫熒光染色。目前，流式細(xì)胞術(shù)有單色、雙色、三色、四色、五色熒光分析，對細(xì)胞的分析更加精密、深入。
免疫熒光染色常用方法：
直接免疫熒光法：用一種（單色）或者多種（多色）熒光素標(biāo)記的McAb染色細(xì)胞后測量其熒光強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)。
間接免疫熒光法：用一種McAb與細(xì)胞作用后，洗去未結(jié)合McAb，再加入熒光素標(biāo)記的第二抗體（如羊抗鼠IgG-FITC），染色細(xì)胞后測量其熒光強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)。

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